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這些ELISA試劑盒的事項要注意
更新時間:2020-01-10   點擊次數:1453次

運用ELISA檢測試劑盒進行實驗時,應別離以陽性對照與陰性對照操控實驗條件,待檢樣品應作一式二份,以保證實驗效果的準確性。ELISA試劑盒有時本底較高,說明有非特異性反應。
在ELISA中,進行各項實驗條件的選擇是很重要的,其間包含:

固相載體的選擇:許多物質可作為固相載體,如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。現在常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不論何種載體,在運用前均可進行挑選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進行反應,觀察其顯色反應是否均一性,據此判明其吸附性能是否良好。

包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,ELISA試劑盒時刻及其蛋白量也有一定影響,一般多選用4℃18~24小時。蛋白質包被的適濃度需進行滴定:即用不同的蛋白質濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進行包被后,在其它實驗條件相一起,觀察陽性標本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。關于大都蛋白質來說一般為1~10μg/ml。

除此之外還要注意以下事項:
1.承認ELISA檢測試劑盒在有效期內;
2.仔細閱讀闡明書;
3.按說明書承認全部試劑*(數量、體積);
4.標本制備要規范,ELISA試劑盒每份標本體積要按2-3個復孔以上的量制備,盡量分裝做備份。短期內無法實驗者,注意低溫保存;
5.依據檢測標本數量承認所需試劑的量;
6.準備好全部實驗額定所需物品,如試管、吸頭、移液器、離心機等;
7.按闡明書將所用試劑平衡至室溫,制作所需試劑。

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